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《GB 4789.12-2025產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》解讀

發(fā)布時間： 2025-11-13　　點擊次數(shù)： 50次

微生物學檢驗標準的更新是食品安全領域風險控制的關鍵環(huán)節(jié)。近期我國陸續(xù)發(fā)布了多項食品安全的新標準，其中包括了《GB4789.12-2025 產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。本標準與 GB4789.12—2016相比，主要變化如下：

— 修改了標準名稱;
— 增加了術語和定義；
— 修改了范圍；
— 增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法；
— 修改了設備和材料、培養(yǎng)基和試劑；
— 修改了檢驗程序、操作步驟、結果與報告及附錄。

該標準將于2026-03-02實施，因此，下面小編就該標準的主要修訂內容進行新舊版本的對比解讀，以便大家盡早做好此新標準實施的應對工作。

一

修改了標準名稱、范圍，增加“產肉毒毒素梭菌"的術語定義

標準名稱修訂：由《食品安全國家標準食品微生物學檢驗肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗》變更為《食品安全國家標準食品微生物學檢驗產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。

范圍修訂：2016版標準適用于“肉毒梭菌"的檢驗；2025版標準適用于“產肉毒毒素梭菌"的檢驗。

新增術語定義“產肉毒毒素梭菌"：革蘭氏陽性厭氧桿菌，能形成卵圓形芽孢，一般芽孢會大于菌體、位于次端,在適宜培養(yǎng)條件下能產生肉毒毒素的一類細菌的統(tǒng)稱。包含肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)等。

技術意義：由于近年來發(fā)現(xiàn)，除肉毒梭菌外，其他梭菌，如E型丁酸梭菌等也可產生肉毒毒素，并引發(fā)食源性肉毒中毒，因此，名稱修改后標準適用性范圍覆蓋肉毒梭菌、丁酸梭菌等產肉毒毒素梭菌檢驗，更科學更精準。

二

增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法

變更內容

2025版標準進一步“增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法"，并在普通PCR部分提供了更詳細的基因序列位置信息（GenBank編號）。

技術意義

根據(jù)不同梭菌的全基因組序列，建立了梭菌屬水平、肉毒梭菌和丁酸梭菌種水平鑒定用熒光PCR方法，實現(xiàn)了對“產肉毒毒素梭菌"的精準菌種鑒定。

針對毒素基因分型檢測，可使用環(huán)凱肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD06P）和肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD07P）。

三

培養(yǎng)基和試劑的修改

變更內容

新增生理鹽水。
新增哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基。
修改“10%胰蛋白酶溶液"改為“胰蛋白酶：1：250 或 0.25%。
新增10×TAE緩沖液。

技術意義：哥倫比亞血平板結合卵黃瓊脂，提高了對各類“產肉毒毒素梭菌"的分離成功率，增強了方法的可靠性。

推薦環(huán)凱明膠磷酸鹽緩沖液（027143）或其即用成品（C27143D1）、TPGYT培養(yǎng)基基礎（027147）或TPGYT肉湯管（C27147G1）、即用型庖肉培養(yǎng)基（含鐵粉）（C27140G2）、哥倫比亞血平板（CP0160）、厭氧卵黃瓊脂基礎（027165）+50%卵黃乳液（029250）。


庖肉培養(yǎng)基（含鐵粉）（C27140G2）	TPGY肉湯（不含胰蛋白酶）（C27147G1）	哥倫比亞血平板（CP0160）


厭氧卵黃瓊脂基礎（027165）	+ 50%卵黃乳液（029250）	厭氧培養(yǎng)相關產品

四

檢驗程序與操作步驟的變化

變更內容

流程圖將固態(tài)、半固態(tài)、液體樣品的rou毒素檢驗方法合并。
調整了皰肉培養(yǎng)基、卵黃瓊脂平板的培養(yǎng)溫度從35℃±1℃調整為36℃±1℃，并將皰肉培養(yǎng)基、TPGYT的培養(yǎng)時間在5d培養(yǎng)后培養(yǎng)基無菌生長應延長培養(yǎng)至10d體現(xiàn)在了流程圖中。
新增哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基，用于觀察肉毒梭菌的菌落形態(tài)。
新標準中革蘭氏染色和PCR毒素編碼基因檢測后再進行rou毒素檢驗和實時熒光PCR，提升檢驗的精確度，將產rou毒素的梭菌精確到梭菌屬和種，不再局限于肉毒梭菌。

技術意義：不同形態(tài)的樣品檢測方法合并后，操作方法更為靈活；培養(yǎng)條件36℃±1℃與其他國家標準的微生物培養(yǎng)溫度更為統(tǒng)一。

五

結果與報告的變化

修訂：2016版“肉毒梭菌檢驗結果報告"修訂為2025版“產肉毒毒素梭菌檢驗結果報告"，需報告樣品中未檢出或檢出產某型肉毒毒素的某種梭菌，如：樣品中檢出產E型肉毒毒素的丁酸梭菌。

技術意義：新增報告不僅能確認樣品中是否存在肉毒毒素風險，還能明確產生該毒素的具體菌種和毒素型別，提升溯源價值。

總結

本次修訂將標準名稱修改為“產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗"，通過增加培養(yǎng)基和不同瓊脂培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)描述等，可實現(xiàn)對產rou毒素的肉毒梭菌和丁酸梭菌的有效檢出。

同時，增加了分離菌鑒定用熒光PCR方法，可快速對可疑菌落進行鑒別。通過上述一系列技術內容的修訂，該標準不再僅適用于食品中肉毒梭菌和肉毒毒素檢驗，而是適用于多種產肉毒毒素梭菌和肉毒毒素的檢驗。

該標準可提高食品中產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的檢出能力，為高風險食品中產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的風險監(jiān)測和評估等風險防控工作提供有力技術支撐。

附錄：GB 4789.12-2025 標準檢驗流程

環(huán)凱配套產品速查表

檢驗環(huán)節(jié)	產品名稱	產品編號	規(guī)格
樣品制備	明膠磷酸鹽緩沖液	027143	250g/瓶
樣品制備	明膠-磷酸鹽緩沖液（袋裝即用成品）	C27143D1	30mL×10袋
增菌培養(yǎng)	TPGYT培養(yǎng)基基礎	027147	250g/瓶
	TPGYT肉湯管（不含胰蛋白酶）	C27147G1	15mL×20支/盒
	庖肉培養(yǎng)基基礎	027140	250g/瓶
	庖肉牛肉粒	027150	100g/瓶
	庖肉培養(yǎng)基（含鐵粉）	C27140G2	15mL×20支/盒
分離鑒定	厭氧卵黃瓊脂基礎	027165	250g/瓶
	50%卵黃乳液	029250	5mL×5支/盒
	哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基	024061	250g/瓶
	哥倫比亞血平板	CP0160	90mm×20個
PCR鑒定	肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR檢測試劑盒	KJD06P	24test
PCR鑒定	肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測試劑盒	KJD07P	24test
染色	革蘭氏染色液	029010	10mL×4瓶
PCR鑒定	厭氧產氣袋/氧氣指示劑	C-1、C-35/C-22	10袋/包
厭氧培養(yǎng)配套產品	圓底立式培養(yǎng)袋/密封培養(yǎng)罐	C-43、C-31/C-32	10個/包

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